T-2 毒素免疫亲和柱说明书 

1、用途：

免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的T-2毒素，从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液，氮吹复溶后可直接用于LC-MS/MS分析或衍生后用HPLC分析。

亲和柱与LC-MS/MS和HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。

2、概述：

T-2毒素（T-2）是由多种镰刀菌产生的一种霉菌毒素。主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物及其制品，对人类健康及畜牧业构成了较大危害。T-2毒素主要影响血液，肝脏，肾脏，胰腺肌肉及淋巴细胞的功能，T-2毒素中毒后的一般临床症状为厌食、呕吐、腹泻、生长停滞、繁殖和神经机能障碍等。

3、原理：

测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过前处理后，缓慢的通过T-2毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用2%乙酸-甲醇洗脱T-2毒素，然后注入到分析仪器中或衍生后注入分析仪器中进行检测。

4、包装组成：

每一个盒中包括各种规格的T-2毒素免疫亲和柱及1份说明书。

5、注意事项：

----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）。

----亲和柱2～8℃储存，不得冻存。

----请在有效日期内使用免疫亲和柱。

----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。

----柱容量：2000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积，重新检测。

----pH：亲和柱的上样溶液pH需在6～8之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节pH。

----上机检测时的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应的影响。

----T-2毒素具有细胞毒性，应戴手套口罩等防护工具操作。

----使用过的容器及T-2毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。

6、配制溶液：

6.1 提取液：80%甲醇-水

用量筒移取800mL甲醇，加入超纯水至1L。

6.2 稀释液：0.01M PBS溶液

称取8g NaCl、0.2g KCl、0.2g KH2PO4和1.16g

Na2HPO4·12H2O；加入800mL超纯水溶解，定容至1L。

7、样品处理：

----25g±0.01g样品（固体样品需粉碎，并过2mm分样筛），加入5g氯化钠与125ml提取液（80%甲醇-水溶液），混匀。

----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤， 收集滤液。

----取10ml滤液加入40ml稀释液稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；

----取25mL上样液用于过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：1

8、操作程序：

8.1 上样

----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成注射器筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定；

----取适量步骤7中处理后的溶液，注入到注射器筒中；

----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2滴/秒的速度流出；

8.2 洗涤

----待液体排干后，用水洗涤2次，每次10ml，流速2～3滴/秒；

8.3 洗脱

----待液体排干后，加入2ml甲醇溶液，用样品瓶接洗脱液，流速1滴/秒；

----每次上样洗脱液均需待液体排干；

----收集洗脱液，于60℃下氮气吹干；

----可以使用LC-MS/MS检测，也可以参照标准GB5009.118—2016、GB/T28718-2012，衍生后用HPLC检测

*每次上样前都要将上次液体完全排干。

9、结果判读：T-2毒素的含量=检测浓度×稀释倍数

贮藏条件及有效期：

贮藏条件：2～8℃。

有效期：该产品有效期为18个月。