黄曲霉毒素M1免疫亲和柱说明书 

1、用途：

免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1，从而对样品起到非常针对性的净化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。

2、概述：

黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。牛乳及其制品易受到黄曲霉毒素M1污染。

3、原理：

测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过离心、脱脂后，缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用乙腈洗脱黄曲霉毒素M1，然后注入到分析仪器中用于检测。

4、包装组成：每一个盒中包括各种规格的黄曲霉毒素M1免疫亲和柱及1份说明书。

5、注意事项：

----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）。

----亲和柱2～8℃储存，不得冻存。

----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。

----柱容量：100ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积

----pH：亲和柱的上样溶液pH需在6～8之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节pH。

----上机检测时的溶剂与流动相保持一致可以消除溶剂效应的影响。

----黄曲霉毒素M1可致癌，应戴手套操作。

----使用过的容器及黄曲霉毒素M1溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。

----当奶粉样品不易溶解时，可以在50℃下静置30min。若还不溶解则适当扩大溶解用的水的比例。

6、配制溶液：

7.1磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS)：称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠(或2.92g十二水磷酸氢二钠)、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾，用900mL水溶解后，用盐酸调节pH至7.4，再加水至1000mL。

7、样品处理：

方法一：液态奶、酸奶

----称取4g混合均匀的试样(精确到0.001g)于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋3min。

----置于4℃、6000r/min下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤，

----取7mL上清液或滤液转移至离心管中，加40mL水稀释，备用。

稀释倍数：0.5

方法二：乳粉、特殊膳食用食品

----称取1g样品(精确到0.001g)于50mL离心管中，加入4mL50℃热水，涡旋混匀。如果乳粉不能完全溶解，将离心管置于50℃的水浴中，将乳粉完全溶解后取出。待样液冷却至20℃后，加入10mL乙腈，涡旋3min。

----置于4℃、6000r/min下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤

----取7mL上清液或滤液转移至烧杯中，加40mL水稀释，备用。

稀释倍数：2

方法三：奶酪

----称取1g已切细、过孔径1mm~2mm圆孔筛混匀样品(精确到0.001g)于50mL离心管中，加入1mL水和14mL乙腈，振荡30min，

----置于4℃、6000r/min下离心10min或经玻璃纤维滤纸过滤，

----将10mL上清液或滤液转移至圆底烧瓶中，

----旋转蒸发至2mL以下，用PBS稀释至30mL。

稀释倍数：1.5

8、操作程序：

----取出免疫亲和柱，1mL的免疫亲和柱：将上方塞子取出剪断，再插回亲和柱上；(3mL的免疫亲和柱：采用转接头与注射器针筒连接。)

----将柱子与气控操作架上的注射器连接固定，取全部步骤8中处理后的溶液上样；

----去掉亲和柱下方堵头（洗脱需使用，无丢弃），调节开关，使液体以1～2滴/秒的速度流出；

----待液体排干后，用蒸馏水或去离子水洗涤10mL，流速2～3滴/秒；

----待液体排干后，更换新针筒，取洗脱液甲醇1mL/次，共4次，用刻度试管接洗脱液，流速1滴/秒；

----洗脱后液体用氮气在50℃条件下吹至近干；

----用初始流动相溶解并定容到1ml；----洗脱液用0

.22μm微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。

* 每次上样前都要将上次液体完全排干。

* 也适用于GB 5009.24-2016。

9、结果判读：黄曲霉毒素M1 的含量=检测浓度×稀释倍数

10、贮藏条件及有效期：

贮藏条件：2～8℃

有效期：该产品有效期为 12 个月。