302多功能净化柱使用说明书 

 

产品特点：

302多功能净化柱可实现检测多种真菌毒素的同时检测，配合LC-MS/MS检测仪器，定量更准确。可检测真菌毒素包括黄曲霉毒素B族、G族、M族，玉米赤霉烯酮，呕吐毒素、雪镰刀菌烯醇，T-2毒素，赭曲霉毒素，伏马毒素，3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇，15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇等。

 

样品种类	样品质量	提取液	提取方法
花生油及其植物油等	5g	20mL 84%乙腈/水	高速均质（≥10,000r/min）5min、摇床（200-300r/min）剧烈振荡20min或超声提取30min，用快速定量滤纸过滤并收集滤液或放入离心机（≥7000r/min离心20min）收集上清液
花生及其制品、坚果、面粉、小麦等粮食作物		20mL 90%乙腈/水
玉米面及饲料		20mL 95%乙腈/水
中药（2015版药典规定的19 味中药）		20mL 95%乙腈/水或纯乙腈
酱油和醋		定容至25 mL 纯乙腈

样品净化：1

步骤1：向试管中加入5mL样品提取液

步骤2：将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端

步骤3：将净化柱上部净化后的样品提取液倒出至样品瓶或EP管中

步骤4：取2mL净化提取液，氮吹至干，用1mL或0.5mL初始流动相复溶，过微孔滤膜，上机分析

 

多功能净化柱使用流程图

 

 

建议方法：

1、溶液配制

提取液：乙腈-水-乙酸混合液（80:19:1）

初始流动相：乙腈-水-甲酸混合液（35：64.9:0.1）

 

2、标品中间储备液配制：

AFG2、B2、G1、B1混标（G2B2：150ppb，G1B1：500ppb）：取500μL AFG2、B2、G1、B1混标母液（G2B2：300ppb，G1B1：1000ppb）加500μL乙腈。

玉米赤霉烯酮ZEN（10ppm）：取200μL 50ppmZEN标品，加入4份200μL乙腈

呕吐毒素DON（75ppm）：取375μL 200ppmDON标品，加入625μL乙腈T-2毒素（1ppm）：将5mgT-2用10mL乙腈溶解，配成500ppmT-2标品，用乙腈稀释500倍，配成1ppm标品

赭曲霉毒素OTA（1ppm）：取100μL10ppmOTA标品，加入9份100μL50%甲醇/乙腈

伏马毒素FB1（10ppm）：取200μL 50ppmFB1标品，加入4份200μL50%乙腈/水

 

3、加标浓度

AFG2、B2（1.5ppb）300ppb: 加15ng

AFG1、B1（5ppb）1ppm:加50ng

玉米赤霉烯酮ZEN（100ppb）50ppm：加1000ng

呕吐毒素DON（750ppb）200ppm：加7500ng

T-2毒素（10ppb）5mg：加100ng

赭曲霉毒素OTA（10ppb）10ppm：加100ng

伏马毒素FB1（100ppb）50ppm：加1000ng

 

4、样品提取

取5g玉米面阴性样品，于50mL离心管中，加入六种标品中间储备液各100μL,加入19.4mL提取液混匀

超声提取30min，放入离心机（8000r/min离心20min），取上清液作为样品提取液

 

5、样品净化

步骤1：向试管中加入5mL样品提取液

步骤2：取净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端

步骤3：将净化柱上部净化后的样品提取液倒出至样品瓶或EP管中

步骤4：取2mL净化提取液，氮吹至干，用1mL或0.5mL初始流动相复溶，过微孔滤膜，上机分析

 

6、仪器条件

色谱柱：C18 2.1*100 1.8μm    柱温：35℃      进样量：2-5μL

流动相：A：5mM乙酸铵（含0.1%甲酸）  B：乙腈（含0.1%甲酸）

Time（min）	流速（mL/min）	A/%	B/%
0	0.3	90	10
2	0.3	90	10
3	0.3	80	20
7	0.3	76	24
10.5	0.3	70	30
13.5	0.3	40	60
15	0.3	30	70
18	0.3	25	75
18.1	0.3	5	95
23	0.3	5	95
23.1	0.3	90	10
30	0.3	90	10

 

MS方法：

序号	目标物	离子对
1	AFB1	313/241,285
2	AFB2	315/259,287
3	AFG1	329/243,311
4	AFG2	331/245,313
5	赭曲霉毒素	404/239,358
6	呕吐毒素	319/69,283
7	T-2毒素	484/185,215
8	伏马毒素	720/157,562.3
9	玉米赤霉烯酮	317/175,187