动物源性食品中利巴韦林残留量的UPLC-MS/MS分析（PBA固相萃取柱）
动物源性食品中利巴韦林残留量的UPLC-MS/MS分析（PBA固相萃取柱）
《SN/T4519-2016出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定液相色谱-质谱质谱法》
一、样品提取
称取5.0g样品于50mL离心管中，加入浓度为1μg/mL同位素内标利巴韦林-13C5溶液10µL，加入12mL20g/L三氯乙酸水溶液和2.5mL乙腈，涡旋混匀30s，超声10min，于8000r/min离心5min，上清液全部转移至50mL离心管中，再向样品中加入10mL20g/L三氯乙酸水溶液重复提取一次，合并两次提取液，用三氯乙酸水溶液定容至25mL，再准确移取5mL，用氨水调节pH至8.5（±0.1）待净化（本实验是采用阴性样本做基质加标实验，故省略酶解步骤）。
二、SPE柱净化（PBA，100mg/3mL）
(1)活化：向PBA柱中依次加入3mL乙腈，3mL0.25mol/L乙酸铵缓冲液（pH=8.5）进行活化。
(2)上样和洗脱：取上述待净化液过柱，控制流速不超过1滴/秒，然后用3mL0.25mol/L乙酸铵缓冲液（pH=8.5）淋洗小柱，弃去全部流出液，抽干小柱，用2mL0.1mol/L甲酸水溶液洗脱，抽干小柱，收集全部洗脱液。
(3)上机：取上述洗脱液过0.22µmPES水系滤膜，供上机分析。
三、标曲配置
采用内标法定量，分别精密量取适量的利巴韦林标准溶液和同位素内标利巴韦林-13C5工作液，用0.1mol/L甲酸水溶液配制成适当浓度的标准工作溶液。
四、仪器条件
色谱条件：
仪器：UPLC-MS/MS（ThermoFisherTQSEndura）
色谱柱：CS211003H（HILIC，2.1mm×100mm，3µm）
流动相：A：5mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）
B：乙腈
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
表1：梯度洗脱程序
|
时间/min |
A/% |
B/% |
|
0 |
5 |
95 |
|
2.0 |
5 |
95 |
|
3.0 |
20 |
80 |
|
3.5 |
30 |
70 |
|
4.5 |
5 |
95 |
|
5.0 |
5 |
95 |
流速：0.4mL/min
柱温：30℃
进样量：2µL
质谱条件：
离子源：HESI
电喷雾电压：3500V
鞘气压力：40arb
辅气压力：1arb
离子传输管：300℃
辅气温度：400℃
表2：组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）
|
名称 |
保留时间/min |
母离子 |
子离子 |
|
利巴韦林 |
1.91 |
245.012 |
96.086，13.083* |
|
利巴韦林-13C5 |
1.90 |
250.05 |
96.083，113.071* |
五、实验结果
表3添加水平为2.0μg/kg动物源性食品中利巴韦林加标回收实验结果
|
目标物 |
基质 |
回收率（%） |
平均回收率（%） |
PSD（%） |
|||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
||||
|
利巴韦林
|
鸡肉 |
106.3 |
103.2 |
107.2 |
107.6 |
106.1 |
2.0 |
|
鸡蛋 |
80.6 |
88.6 |
98.0 |
84.9 |
88.0 |
7.4 |
|
五、订购信息
|
货号 |
描述 |
包装 |
|
JYPBA3100 |
PBA固相萃取柱，100mg/3mL |
30支/盒 |
|
SF130-22-PES |
PES针式过滤器，直径13mm，孔径0.22µm，水系 |
100个/盒 |
|
MF047-45-MCE |
混合纤维素滤膜，直径47mm，孔径0.45μm，水系 |
100片/盒 |
|
MF047-22-NL |
NL滤膜，直径47mm，孔径0.22µm，有机系 |
100片/盒 |