玉米赤霉烯酮免疫亲和柱说明书 

1、 用途：

免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的玉米赤霉烯酮，从而对样品起到非常针对性的净化作用，过柱净化后的样品液可直接用于 HPLC 分析或氮吹复溶后用 LC-MS/MS 分析。

2、 概述：

玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）又称 F-2 毒素，主要由镰刀菌属菌株产生，其成分为禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等产生的 2，4-二羟基苯甲酸内酯类化合物。

3、 原理：

测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到分析仪器中用于检测。

4、 包装组成：

每一个盒中包括各种规格的玉米赤霉烯酮免疫亲和柱及 1份说明书。

5、 需要的材料但盒中不提供：

5.1设备及耗材

----HPLC/LC-MS/MS

----气控操作架

----空气泵

----天平

----高速均质器（转速≥10,000r/min）或摇床

----粉碎机

----分样筛

----pH计

----量筒：100mL/10mL

----漏斗：50mL

----注射器：10 mL/20mL

----移液器或移液管：1mL

----均质杯（或 250mL 具塞锥型瓶）

----样品瓶

----快速定性滤纸

----微纤维滤纸（Whatman 934-AH）

5.2试剂

----甲醇（CH3OH）：色谱纯

----乙腈（CH3CN）：分析纯

----氯化钾（KCl）：分析纯

----氯化钠（NaCl）：分析纯

----磷酸二氢钾（KH2PO4）：分析纯

----十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）：分析纯

----乙酸（CH3COOH）：色谱纯

----吐温-20（C58H114O26）：分析纯

----氢氧化钠(NaOH）：分析纯

----盐酸(HCl）：分析纯

----水（H2O）：蒸馏水或去离子水

6、注意事项：

----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）。

----亲和柱 2～8℃储存，不得冻存。

----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。

----柱容量：1500ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积，重新检测。

----pH：亲和柱的上样溶液 pH 需在 6～8 之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节 pH。

----玉米赤霉烯酮可致癌，应戴手套口罩的等防护工具操作。

----使用过的容器及标准品溶液用次氯酸钠溶液（5%V/V） 浸泡过夜。

----上机检测时的溶剂与流动相保持一致，可以消除溶剂效应的影响。

7、配液

7.1 提取液：80%乙腈

----用量筒移取 800mL 乙腈，加入超纯水定容至至 1L。

7.2 稀释液：0.01M PBST 溶液

----称取 8g NaCl、0.2g KCl、0.2g KH2PO4和 1.16g Na2HPO4·12H2O，加入800mL 超纯水溶解，加入2mL Tween-20，定容至1L。

8、样品处理：粮食及饲料 

----20g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过 2mm 分样筛）加入100mL 提取液（80%乙腈-水溶液）混匀；

----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min） 剧烈振荡 20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；

----取10mL滤液加入40mL稀释液稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；

----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：1

9、操作程序：

----取出免疫亲和柱，将注射器筒的下端直接穿透亲和柱上方的塞子，完成注射器筒与亲和柱的连接，将其放置在气控操作架上进行固定；

----取适量步骤8中处理后的溶液，注入到注射器筒中；

----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2滴/秒速度流出；

----待液体排干后，用10mL水洗涤2次，流速2～3滴/秒；

----待液体排干后，上样1mL甲醇，流速1滴/秒，收集洗脱液并定容至1mL；

----洗脱液用0.22μm微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。

* 每次上样前都要将上次液体完全排干。

* 也适用于 GB 5009.209-2016 和GB/T 28716-2012。

10、结果判读：

玉米赤霉烯酮的含量=检测浓度×稀释倍数

11、贮藏条件及有效期

贮藏条件：2～8℃。

有效期：该产品有效期为 12 个月。